1、取已经培养好的细菌琼脂平板，加入2ml新鲜的生理盐水，用L棒轻轻将菌落刮下，收集在1.5 ml EP管中。
2、取10 μl菌液涂布在载玻片上，干燥固定后进行格兰染色鉴定。
3、将EP管置于离心机，5000RPM离心5min。
4、弃上清，取1ml完全无抗1640培养基重悬细菌；取新的1.5 ml EP管，加入950 μl生理盐水，及50 μl菌液，混匀（稀释20倍）。
5、在分光光度计上测定OD值：以生理盐水作为空白对照调零，测定稀释20倍的菌液的吸光度，若OD值在0.3-0.7的范围内，则按照1OD=1.0×109 CFU/ml计算原始菌液浓度。若OD值大于0.7且小于1，则取原始菌液进行40倍稀释后测定吸光度值。若OD值小于0.3，则取原始菌液进行10倍或5倍稀释后测定吸光度值。务必将OD值调整到0.3-0.7的范围内。
