制备动物基因组DNA的具体步骤

 时间:2024-10-12 14:10:44

1、首先,取贴壁生长培养的细胞一瓶,除去培养基,用五毫升的冰的PBS洗一次,用胰酶进行消化,在四摄氏度1000r/min下离心十分钟。

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2、然后,取细胞沉淀添加十毫升的冰PBS,悬浮洗涤,在四摄氏度1000r/min下什置葆鸳离心十分钟,用细胞沉淀的10-40倍量的DNA抽提缓冲液约20ml悬浮细胞。

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3、然后,添加1/100倍体积的百分之十的SDS,再添加蛋白酶K,使其最后质量浓度为一百微克没毫升。

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4、然后,在五十五摄氏度下保温两个半小时,期间轻缓地倒转几次,用等量的苯酚/氯仿/异戊醇抽提进行轻柔的混匀。

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5、然后,在室温条件下,以3000r/min速率离心十分钟,将上清液移至新的离心管中,用等量的氯仿/异戊醇抽提,然后在重复刚刚的离心和转移新的离心管。

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6、然后,添加1/10体积的3mol/lNaAc以及2倍的冷乙醇,进行混匀在3000r/min离心两分钟,沉淀用70%的冷乙醇清洗、离心、干燥,用1ml的TE缓冲液悬浮。

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7、最后,用电泳或者在260nm条件下测定光密度,计算DNA的含量,然后将其储存在4摄氏度的冰箱中。

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